糞便總 DNA 提取試劑盒

 Fecal Total DNA Extraction Kit

（適用于從各種糞便中提取總 DNA）

糞便總 DNA 提取試劑盒

試劑盒組成：50 (50 次)

儲存條件

本試劑盒在室溫（15-25 ℃）下可保存一年。 

產品特點：

TM Fecal Total DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技術，*去除糞便中的各種干擾物，提取高純度的 DNA。試劑盒采用了*的緩沖系統，可從多種不同類型的糞便樣中快速提取總 DNA (包括各種類型的細菌、真菌和脫落細胞)等。

注意事項：

1.實驗前準備工作：詳細閱讀該手冊熟悉各步驟，并準備好所有的試劑盒組分、研缽、研棒、藥匙、1.5 ml 和 2 ml 滅菌離心管以及 37 ℃和 65 ℃ 的溫浴條件。

2.KSL1, KBL1 和 KW1 在低溫時可能產生混濁或沉淀，在 37-65 ℃溫浴片刻即可。

3.Buffer KW *次使用前請按瓶上標簽加入 50 ml 無水或 95%乙醇。每次使用后，請立即擰緊蓋子。

操作步驟：

（一）平衡吸附柱

1.取一 TM Mini Column 柱裝在一個 2 ml 收集管上（已備）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子內，室溫 13 000 rpm 離心 1 min，使平衡液*流過柱子。棄收集管中的濾液，將空柱套回收集管內。

注意：柱子不平衡，將導致 DNA 產率減少。

(二) 樣品處理

2.可根據不同條件選擇以下方法：

A：研磨法：

1)液氮研磨: 取 10 - 30 mg 新鮮糞便樣品于研缽中，加入少量液氮， 迅速研磨，待樣品磨碎，再加少量液氮，再研磨，如此三次。將樣品迅速轉入 2 ml 離心管，加入 600-1000 μl Buffer KSL1，65℃水浴 15 min，其間混勻 2-3 次。然后 13,000 rpm,常溫離心，5 min.

2)小心將上清液轉至干凈的 2ml 離心管，加入 1.0-1.5 倍體積的異丙醇， 混勻， 13,000 rpm, 3 min, 離心棄去去上清; 保留沉淀。在沉淀中加入 100μl KE,*溶解,然后加入 1000-1500 μl KBL1，13,000 rpm, 2 min，上清液待轉移。

Ｂ.微波加熱法

1)取 10 - 30 mg 新鮮糞便樣品于 2 ml  離心管中，加入 600-1000 μl Buffer KSL1，強烈混勻，盡量不保留大的顆粒。65℃水浴 15 min，其間混勻 2-3 次。然后 13,000 rpm,常溫離心，5 min.  上清和沉淀都要備用。

2)上清液轉入新的 2 ml 離心管，待用。

3)將帶有沉淀的離心管放入普通微波爐，大功率下，加熱 1min；待結束后再加熱另一個 1 min；然后第三個 1 min.

4)加入 600-1000 μl Buffer KSL1 于加熱的離心管內，強烈混勻，65℃ 水浴 15 min，其間混勻 2-3 次。然后 13,000 rpm,常溫離心，5 min. 上清備用。

5)上清轉移至另一新的 2 ml 離心管。

6)在2) 和5) 的上清液中分別加入1.0-1.5 倍體積的異丙醇，混勻1 min, 常溫離心 13,000 rpm, 3 min, 去上清; 保留沉淀。在沉淀中分別加入 100 μl KE 溶解。合并兩個離心管的溶液。

7)加入 1000-1500 μl KBL1，混勻。一般不會出現沉淀，如有，離心棄去沉淀。

（三）吸附

3.將上清液轉移到平衡過的吸附柱內，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，使裂解液*流過柱子。棄去收集管中的過濾液，將吸附柱套回收集管中。注意：1）室溫太低可能造成 KBL1 混濁或沉淀，在 37 ℃溫浴片刻即可。

2）如上清液體積過大，可以分成數次上柱，每次上樣量不要超過 700

μl。

4.（可選）加入 30 μl  濃度為 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上，37 ℃

放置 5-10 min。

注意：本試劑盒沒有配備 RNase A 溶液。一般來說，這一步沒有必要，因為本試劑盒的純化柱對 RNA 沒有吸附能力。如果實驗要求不能殘留微量RNA，可采用這一步處理。

(四) 漂洗

5. 加入 700 μl Buffer KW1，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，棄去收集管中的過濾液，保留柱。

7.加入 700 μl Buffer KW，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，棄去收集管中的過濾液，保留柱。注意：Buffer KW 在*使用之前必須加入 50 ml 無水或95%乙醇，并置于室溫下保存。

8.（可選）重復用 700 μl 70%乙醇（室溫）洗滌柱子，室溫 13 000 rpm

離心 1 min。（注意：用 70%乙醇漂洗有利于提高 DNA 純度）

9.棄去收集管中的濾液，將空柱套回收集管內。室溫下，13 000 rpm 離心 2 min 以甩干柱子基質殘余的液體。

注意：此步驟不可省，否則將導致乙醇殘留于 DNA 中，影響后續反應。(五)洗脫

10.把柱子裝在一個新的 1.5 ml 離心管上，加入 50 μl 的 KE（可用滅菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或純水代替，純水可預先用 NaOH 調 pH 值至 8.0），65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 離心 1 min 以洗脫 DNA。（也可以將 KE 預熱至 65℃，再加至膜上，可以減少放置時間至 1min）

注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中間部位，并確保液體將膜全部覆蓋。

11.DNA 應保存于 4 ℃，若長時間保存，可凍存于-20 ℃。

本司部分DNA提取試劑盒，致電：020-8257 4011楊永漢

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